gapped duplex mutagenesis

Гэповый дуплексный мутагенез — введение (внесение) мутаций в молекулу ДНК путем использования ДНК с однонитчатыми участками, или гэпами. Такие молекулы ДНК могут быть образованы путем гибридизации однонитчатой ДНК-вектора (напр., pBR322, см.), несущей инсерцию, с гомологичной однонитчатой ДНК-вектором, не имеющей инсерции. В результате воссоединения этих двух однонитчатых последовательностей образуется двунитчатая молекула, внутри которой ДНК будет однонитчатой в районе инсерции из-за отсутствия гомологии. Затем проводят гибридизацию соответственно подобранного олигодезоксинуклеотидного праймера, состоящего из 16-18 оснований и несущего один или более несовпадающих нуклеотидов. С помощью ДНК-полимеразы I брешь заполняется и ковалентно зашивается ДНК-лигазой. После трансфекции в бактерию мутанты идентифицируются с помощью соответствующей техники отбора. В процессе репарационного синтеза (см. Репарация) в ДНК могут вводиться также аналоги оснований.